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检测原理：
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被(Egr 1)抗体的包被微孔中，依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中Egr 1)呈正相关。用酶标仪在450m波长
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品：
仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 μL、20μL、200 μL、1000 μL)。
耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸酯(DEPC)水处理的离心管、吸头(10 μL、200 μL、1000 μL)、双蒸水。
操作注意事项：
使用夹心法,一般的操作步骤为:
将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体;
加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结;
洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗体,与待测抗原进行键结;
洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一次抗体键结;
洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果;
间接法,一般的操作步骤为:
将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原。
加入待测检体,检体中若含有待测的一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。
洗去多余待测检体,加入带有酶的二次抗体,与待测的一次抗体键结。
洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酶呈色,藉仪器测定塑胶盘中的吸光值,以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
竞争法,其操作步骤为:
将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体
加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结,即所谓竞争法之由来。
试剂的准备：
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法：
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1mi后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔，37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1in,甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内，在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线：在Ec工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应0D值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能：
一、、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
**免责声明**
本ELISA试剂盒仅供科学研究使用，不适用于临床诊断或决策。用户在使用本产品时应具备相关的实验技能和知识，。在开始实验前，请仔细阅读并理解产品说明书和此免责声明。
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