产品名称/贷号/CAS:KKX-16654R
英文名称:Human aspartate aminotransferase/ASTM kit
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被(ALDH1B1)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷氨酸(ALDH1B1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。
样品收集、处理及保存方法
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血清
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使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激。
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收集血液后,3000转/分离心10分钟,将血清和红细胞迅速小心地分离。
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血浆
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EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
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3000转/分离心30分钟取上清。
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细胞上清液
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组织匀浆
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将组织加入适量生理盐水捣碎。
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3000转/分离心10分钟取上清。
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保存
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如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20°C,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
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酶标仪(450nm)
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高精度加样器及枪头:0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL
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37°C恒温箱
操作注意事项
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保存与平衡
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试剂盒应保存在2-8°C,使用前需在室温下平衡20分钟。
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从冰箱取出的浓缩洗涤液可能会有结晶,这属于正常现象,可通过水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
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板条保存
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实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
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标准品与样本稀释
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浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或空白。
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按照说明书操作时,样本已经稀释5倍,最终结果需乘以5才是样本的实际浓度。
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严格按照操作时间与顺序
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严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
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充分摇匀液体组分
试剂盒组成
名称
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96孔配置
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48孔配置
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备注
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微孔酶标板
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12孔×8条
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12孔×4条
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无
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标准品
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0.3mL×6管
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0.3mL×6管
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无
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样本稀释液
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6mL
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3mL
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无
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检测抗体-HRP
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10mL
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5mL
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无
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20×洗涤缓冲液
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25mL
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15mL
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按说明书进行稀释
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底物A
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6mL
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3mL
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无
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底物B
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6mL
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3mL
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无
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终止液
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6mL
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3mL
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无
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封板膜
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2张
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2张
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无
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说明书
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1份
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1份
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无
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自封袋
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1个
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1个
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无
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试剂的准备
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20×洗涤缓冲液的稀释
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蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
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手工洗板
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甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1分钟,甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
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自动洗板机
操作步骤
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从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4°C。
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设置标准品孔和样本孔
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标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
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样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
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加入检测抗体
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除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37°C水浴锅或恒温箱温育60分钟。
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洗涤
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弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1分钟,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
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加入底物
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每孔加入底物A、B各50μL,37°C避光孵育15分钟。
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终止反应
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每孔加入终止液50μL,15分钟内在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
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绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
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准确性
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标准品线性回归与预期浓度相关系数 ( R ) 值大于等于0.9900。
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灵敏度
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特
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重复性
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贮藏
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有效期
免责声明
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试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
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严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
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