试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。