鸡E-coli Ab测定大肠杆菌抗体elisa检测试剂盒
使用说明书
检测原理：
鸡E-coli Ab测定大肠杆菌抗体elisa检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被微囊藻毒素LR(MC-LR)抗体的包被微孔中，依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的微囊藻毒素LR(MC-LR)呈正相关。用酶标仪在450m波长
下测定吸光度(0D值)，计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品：
*移液器和移液头**：用于量取液体，确保移液头与实验需求匹配。
**微量离心机**：用于样本的离心处理。
**恒温水浴或孵育器**：控制孵育温度，通常是37°C。
**洗板机**：用于清洗微孔板，减少非特结合。
**酶标仪**：测量吸光值，通常在450nm或其他波长。
**振荡器**：混合溶液，确保成分均匀。
**微量滴定管和量筒**：用于较大体积液体的转移。
**冷藏设备**：保持某些试剂在合适的低温环境中。
**实验室记事本和笔**：记录实验步骤和数据。
**防护装备**：实验服、手套、护目镜等，保护实验者安全。
**标准曲线绘制工具**：如Excel或其他数据分析软件，用于处理数据和绘制标准曲线。
**样本处理设备**：如离心机、匀浆器（视样本类型而定）。
**计时器**：确保每个步骤的时间准确。
在开始实验前，确保所有设备已校准，试剂新鲜且在有效期内，同时遵循实验室的安全规程。如果实验涉及生物样本，还需遵守生物安全规定
操作注意事项：
血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固1020分钟，2-8C条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
血浆：应根据标本的要求选择DTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合1020分钟后，2-8C条件离心20分钟左右(20003000转/分)，仔细收
集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。28C条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形
成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取1g组织，加入9g的H7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(20003000转
分)，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就在液氮中充分研磨.
试剂的准备：
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法：
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1mi后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔，37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1in,甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内，在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线：在Ec工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应0D值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能：
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2.灵敏度：最-低检测浓度小于1.0ng儿。
3.特：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月
**免责声明**
本ELISA试剂盒仅供科学研究使用，不适用于临床诊断或决策。用户在使用本产品时应具备相关的实验技能和知识，。在开始实验前，请仔细阅读并理解产品说明书和此免责声明。
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